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酶聯免疫吸附劑測定法
基本原理
①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某種酶連接成酶标抗原或抗體，這種酶标抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢标本（測定其中的抗體或抗原）和酶标抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與其他物質分開，最後結合在固相載體上的酶量與标本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物後，底物被酶催化變為有色産物，産物的量與标本中受檢物質的量直接相關，故可根據顔色反應的深淺來進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。
ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：
①固相的抗原或抗體
②酶标記的抗原或抗體
③酶作用的底物。根據試劑的來源和标本的性狀以及檢測的具備條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。常用的是間接法。
間接法
間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶标記的抗體檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：
（1）将特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。
（2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體複合物。經洗滌後，固相載體上隻留下特異性抗體。其他抗體及血清中的雜質由于不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。
（3）加酶标抗抗體：與固相複合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地标記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶标羊抗人IgG抗體。
（4）加底物顯色：顔色深度代表标本中受檢抗體的量。
本法主要用于對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是隻要變換包被抗原就可利用同一酶标抗抗體建立檢測相應抗體的方法。
間接法成功的關鍵在于抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結果，但應盡可能予以純化，以提高試驗的特異性。特别應注意除去能與一般健康人血清發生反應的雜質，例如以E.Coli為工程酶的重組抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能與受過E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗體發生反應。抗原中也不能含有與酶标抗人Ig反應的物質，例如來自人血漿或人體組織的抗原，如不将其中的Ig去除，試驗中也發生假陽性反應。另外如抗原中含有無關蛋白，也會因競争吸附而影響包被效果。
間接法中另一種幹擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性抗體。病人血清中受檢的特異性IgG隻占總IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強，非特異IgG可直接吸附到固相載體上，有時也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中，抗原包被後一般用無關蛋白質（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封閉（blocking）固相上的空餘間隙。另外，在檢測過程中标本須先行稀釋（1:40~1:200），以避免過高的陰性本底影響結果的判斷。